一、概述
　　六胜肽（乙酰基六肽-8）作为一种高效的神经递质抑制类胜肽，在化妆品领域具有广泛的应用前景。其通过抑制儿茶酚胺和乙酰胆碱的过度释放，阻断神经肌肉间的信号传导，从而减少肌肉收缩，达到抚平皱纹、改善肤质的功效。
　　二、六胜肽的合成
　　目前，六胜肽的合成多采用直线式固相合成法，即按照氨基酸序列依次连接各个氨基酸，存在合成步骤多、副反应风险高、总收率低等问题。本研究利用固相合成方法，采用汇聚式合成策略，将六胜肽拆分为两个三肽片段分别合成后再进行组装。
　　本项目确定的六胜肽的固相合成是以氨基树脂为基础，以精氨酸起始，按照六胜肽氨基酸序列依次进行缩合，步骤为：
　　①树脂活化。在玻璃砂芯树脂柱中先加入氨基活化树脂，加10倍量DCM溶胀30分钟。
　　②去保护。连接水泵减压下抽掉DCM，加DMF洗涤3遍，加脱帽液（20%哌啶/DMF溶液），N2鼓吹5分钟，断裂Fmoc保护基，让α-位的氨基裸露出来，抽掉脱帽液，DMF洗涤5—6遍。
　　③接肽反应。加缩合剂（常用TBTU、DIEA）和第一个氨基酸（精氨酸，一般加3当量），在N2鼓吹搅拌作用下反应30分钟，让裸露的氨基和精氨酸的羧基连接成酰胺键，接上第一个氨基酸Fmoc-Arg，再用脱帽剂去保护、最后进行酸胺缩合反应，按照上述步骤，依次接上Fmoc-Arg（精氨酸）、Fmoc-Gln（谷氨酰胺）、Fmoc-Met（甲硫氨酸）、Fmoc-Glu（谷氨酸）、Fmoc-Glu（谷氨酸）。
　　④乙酰化反应和肽的收缩。在反应柱中加入乙酸酐、吡啶、缩合剂、DIEA，N2鼓吹进行乙酰化反应30分钟，接上最后一个乙酰基后，进行肽的收缩，DMF洗涤3遍，DCM洗涤3遍，加甲醇洗涤反应3分钟，抽干肽树脂。
　　⑤检测。取反应树脂混合液少许，加DMF洗涤，通过茚三酮—苯酚—吡啶—加热2分钟，观察溶液及树脂是否变色，或通过Mass检测是否成功合成六胜肽（分子量889）。
　　⑥六胜肽的切割。将树脂反应液转移到圆底烧瓶，加切割液（86%TFA+4%苯甲硫醚+5%EDT+3%蒸馏水+2%苯酚）密封下室温振摇2小时，抽滤，滤液加入大量冷乙醚中，析出沉淀，抽滤，冷乙醚洗涤，得六胜肽粗品。粗品可经制备色谱进一步纯化。该途径有效降低了线性合成中误差累积的风险，提高了产物纯度与总收率。
　　在工艺优化方面，考察了①缩合剂种类，对比了HATU、TBTU、HOBt/EDCI和HBTU等常用缩合体系。以收率为指标，综合成本等因素，选择TBTU/DIEA作为缩合体系。②考查了精氨酸用量，确定3.0当量为最佳配料比。③通过系列单因素实验优化了缩合反应时间，确定30分钟为最佳反应时间。
　  三、结论
　　本研究通过采用汇聚式合成策略，并系统优化缩合体系、配料比与反应时间，建立了高效、经济、适于放大的六胜肽合成工艺。在TBTU/DIEA为缩合剂、氨基酸用量为3.0当量、反应时间30分钟的条件下，六胜肽的合成收率稳定在82%以上，具备良好的工业转化潜力。该工艺为其他功能性短肽的合成开发提供了有益借鉴。
　　

本文系2023年大学生创新创业训练计划项目“六胜肽合成工艺优化”研究成果（项目编号：S202313123041）